Im zweiten Teil hat der einstige Schurke Gru sein Herz an Agentin Lucy Wilde verloren. Gemeinsam mit ihr und seinen drei Adoptivtöchtern Margo, Edith und Agnes kämpft er nun gegen das Böse. Sein neuer Gegenspieler ist Balthazar Bratt: ein Superschurke mit Vokuhila, Schulterpolstern und einer großen Vorliebe für die 80er-Jahre, der es auf einen riesigen rosa Diamanten abgesehen hat.

Während Gru Bratt aufhalten will, taucht plötzlich sein Zwillingsbruder Dru auf. Mit vollem Haar, viel Selbstvertrauen und größerem Erfolg scheint Dru seinem Bruder in allem überlegen zu sein. Gru ist davon wenig begeistert – zumal er nicht einmal seine Minions im Griff hat. Als Bratt seinen teuflischen Plan in die Tat umsetzt, müssen die ungleichen Brüder jedoch zusammenarbeiten, um die Welt zu retten.